Insegnamento METODOLOGIE BIOCHIMICHE
- Corso
- Biologia
- Codice insegnamento
- GP004082
- Curriculum
- Biosanitario
- Docente
- Serena Porcellati
- Docenti
-
- Serena Porcellati
- Elisabetta Chiaradia (Codocenza)
- Sandra Buratta (Codocenza)
- Ore
- 25 ore - Serena Porcellati
- 10 ore (Codocenza) - Elisabetta Chiaradia
- 12 ore (Codocenza) - Sandra Buratta
- CFU
- 6
- Regolamento
- Coorte 2021
- Erogato
- 2021/22
- Attività
- Affine/integrativa
- Ambito
- Attività formative affini o integrative
- Settore
- BIO/10
- Tipo insegnamento
- Opzionale (Optional)
- Tipo attività
- Attività formativa monodisciplinare
- Lingua insegnamento
- ITALIANO
- Contenuti
- Tecniche spettrofotometriche. Tecniche elettroforetiche. Spettrometria di massa applicata allo studio delle proteine
- Testi di riferimento
- Keith Wilson and John Walker: Biochimica e biologia molecolare:Principi e tecniche¿ EDs. 2019 Raffaello Cortina Editore. ¿
M.Maccarrone: Metodologie Biochimiche e Biomolecolari, Zanichelli Editore
Bonaccorsi, Contestabile, Di Salvo -Metodologie biochimiche-Casa Editrice Ambrosiana. Distrib. Zanichell - Obiettivi formativi
- Conoscenze: lo studente deve conoscere le metodiche spettrofotometriche e elettroforetiche per lo studio delle biomolecole principali biomolecole, nonchè le metodiche di spettrometria di massa per l'identificazione di proteine
Capacità: lo studente deve essere in grado di impostare un protocollo per la separazione e l'analisi quali/quantitativa delle principali biomolecole mediante spettrofotometria nonchè per l'identificazione di specifiche proteine mediante spettrometria di massa - Prerequisiti
- Conoscenze di base di Chimica Organica e di Biochimica
- Metodi didattici
- Lezioni frontali in aula svolte con l'ausilio di proiezioni di diapositive
- Altre informazioni
- Frequenza facoltativa .
- Modalità di verifica dell'apprendimento
- Colloquio su gli argomenti del corso durante l'esame completo tenuto insieme agli altri docenti
- Programma esteso
- Tecniche spettroscopiche-, spettroscopie di emissione e di assorbimento, assorbanza e trasmittanza, spettrofotometria UV/visibile, transizioni elettroniche, caratteristiche dei cromofori, legge di Lambert-Beer, lo spettrofotometro applicazioni della spettrofotometria UV/visibile, Rette di tarature per analisi quantitative. Metodi per il dosaggio delle proteine: bradford, biureto, BCA, Lowry. Principi della spettroscopia di fluorescenza, alcune applicazioni in biochimica. lo spettrofluorimetro, Fosforescenza (cenni)- (2.5 ore).
Tecniche elettroforetiche: Principi generali. Elettroforesi su Gel di agarosio e poliacrilammide (PAGE) e criteri di utilizzo. Elettroforesi orizzontale e verticale Elettroforesi su SDS-PAGE ed elettroforesi in condizioni native. Colorazione dei gel: Comassie brilliant Blue, Silver staining, colorandi fluorescenti e criteri di utilizzo; bromuro di etidio. (2.5 ore).
Techiche di Blotting: principi generali, cenni di Southern e Northern Blotting., Wester Blotting: trasferimento, Rivelazione delle proteine: tramite colorazione su membrana (Ponceau S) o con anticorpi coniugati ad enzimi. Immunoblotting: le diverse fasi (2.5 ore).
Proteomica: principi generali, approccio gel based e gel free. Elettroforesi bidimensionale: Preparazione del campione, isolettrofocalizzazione, equilibrazione, SDS Page. Colorazione dei gel. Techica DIGE. Analisi densitometrica differenziale dei gel. Spettrometria di massa e fingerprinting proteico: MALDI-TOF, and ESI-. Analisi in banca dati per l'identificazione della proteina (2.5 ore)