Università degli Studi di Perugia

Insegnamento METODOLOGIE BIOCHIMICHE

Corso
Biologia
Codice insegnamento
GP004082
Curriculum
Biosanitario
Docente
Serena Porcellati
Docenti
  • Serena Porcellati
  • Sandra Buratta (Codocenza)
  • Elisabetta Chiaradia (Codocenza)
Ore
  • 25 ore - Serena Porcellati
  • 12 ore (Codocenza) - Sandra Buratta
  • 10 ore (Codocenza) - Elisabetta Chiaradia
CFU
6
Regolamento
Coorte 2021
Erogato
2021/22
Attività
Affine/integrativa
Ambito
Attività formative affini o integrative
Settore
BIO/10
Tipo insegnamento
Opzionale (Optional)
Tipo attività
Attività formativa monodisciplinare
Lingua insegnamento
ITALIANO
Contenuti
Tecniche spettrofotometriche. Tecniche elettroforetiche. Spettrometria di massa applicata allo studio delle proteine
Testi di riferimento
Keith Wilson and John Walker: Biochimica e biologia molecolare:Principi e tecniche¿ EDs. 2019 Raffaello Cortina Editore. ¿
M.Maccarrone: Metodologie Biochimiche e Biomolecolari, Zanichelli Editore
Bonaccorsi, Contestabile, Di Salvo -Metodologie biochimiche-Casa Editrice Ambrosiana. Distrib. Zanichell
Obiettivi formativi
Conoscenze: lo studente deve conoscere le metodiche spettrofotometriche e elettroforetiche per lo studio delle biomolecole principali biomolecole, nonchè le metodiche di spettrometria di massa per l'identificazione di proteine
Capacità: lo studente deve essere in grado di impostare un protocollo per la separazione e l'analisi quali/quantitativa delle principali biomolecole mediante spettrofotometria nonchè per l'identificazione di specifiche proteine mediante spettrometria di massa
Prerequisiti
Conoscenze di base di Chimica Organica e di Biochimica
Metodi didattici
Lezioni frontali in aula svolte con l'ausilio di proiezioni di diapositive
Altre informazioni
Frequenza facoltativa .
Modalità di verifica dell'apprendimento
Colloquio su gli argomenti del corso durante l'esame completo tenuto insieme agli altri docenti
Programma esteso
Tecniche spettroscopiche-, spettroscopie di emissione e di assorbimento, assorbanza e trasmittanza, spettrofotometria UV/visibile, transizioni elettroniche, caratteristiche dei cromofori, legge di Lambert-Beer, lo spettrofotometro applicazioni della spettrofotometria UV/visibile, Rette di tarature per analisi quantitative. Metodi per il dosaggio delle proteine: bradford, biureto, BCA, Lowry. Principi della spettroscopia di fluorescenza, alcune applicazioni in biochimica. lo spettrofluorimetro, Fosforescenza (cenni)- (2.5 ore).
Tecniche elettroforetiche: Principi generali. Elettroforesi su Gel di agarosio e poliacrilammide (PAGE) e criteri di utilizzo. Elettroforesi orizzontale e verticale Elettroforesi su SDS-PAGE ed elettroforesi in condizioni native. Colorazione dei gel: Comassie brilliant Blue, Silver staining, colorandi fluorescenti e criteri di utilizzo; bromuro di etidio. (2.5 ore).
Techiche di Blotting: principi generali, cenni di Southern e Northern Blotting., Wester Blotting: trasferimento, Rivelazione delle proteine: tramite colorazione su membrana (Ponceau S) o con anticorpi coniugati ad enzimi. Immunoblotting: le diverse fasi (2.5 ore).
Proteomica: principi generali, approccio gel based e gel free. Elettroforesi bidimensionale: Preparazione del campione, isolettrofocalizzazione, equilibrazione, SDS Page. Colorazione dei gel. Techica DIGE. Analisi densitometrica differenziale dei gel. Spettrometria di massa e fingerprinting proteico: MALDI-TOF, and ESI-. Analisi in banca dati per l'identificazione della proteina (2.5 ore)
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