Insegnamento METODOLOGIE BIOCHIMICHE
- Corso
- Biologia
- Codice insegnamento
- GP004082
- Curriculum
- Bionutrizionistico
- Docente
- Carla Emiliani
- Docenti
-
- Carla Emiliani
- Sandra Buratta (Codocenza)
- Ore
- 35 ore - Carla Emiliani
- 12 ore (Codocenza) - Sandra Buratta
- CFU
- 6
- Regolamento
- Coorte 2019
- Erogato
- 2019/20
- Attività
- Affine/integrativa
- Ambito
- Attività formative affini o integrative
- Settore
- BIO/10
- Tipo insegnamento
- Opzionale (Optional)
- Tipo attività
- Attività formativa monodisciplinare
- Lingua insegnamento
- Italiano
- Contenuti
- Lavorare in un laboratorio di Biochimica. Metodologie per la produzione di proteine ricombinanti. Metodologie per la purificazione delle proteine: tecniche di separazione, purificazione e analisi. Metodi spettroscopici per lo studio delle proteine. Spettrometria di massa. Enzimi e tecniche di analisi dell’attività enzimatica enzimatica.
- Testi di riferimento
- Keith Wilson and John Walker: Biochimica e biologia molecolare:Principi e tecniche¿ EDs. 2019 Raffaello Cortina Editore. ¿
M.Maccarrone: Metodologie Biochimiche e Biomolecolari, Zanichelli Editore
Bonaccorsi, Contestabile, Di Salvo -Metodologie biochimiche-Casa Editrice Ambrosiana. Distrib. Zanichell - Obiettivi formativi
- Conoscenze: al termine del corso lo studente deve conoscere le metodologie biochimiche focalizzate principalmente sulle strategie e tecniche di espressione, purificazione e caratterizzazione delle proteine.
Capacità: al termine del corso lo studente deve essere in grado di comprendere quali sono gli strumenti necessari per affrontare lo studio delle proteine e più in generale delle macromolecole biologiche - Prerequisiti
- Conoscenze di base di Chimica Organica e di Biochimica
- Metodi didattici
- Lezioni frontali in aula inerenti agli argomenti previsti dal programma. Le lezioni saranno svolte con l'ausilio di proiezioni di diapositive e filmati. Alcune lezioni saranno svolte in laboratorio con l’ausilio di tutors
- Altre informazioni
- Frequenza facoltativa ma fortemente consigliata.
- Modalità di verifica dell'apprendimento
- Consiste in una prova scritta che servirà ad accertare il livello di conoscenza e capacità di comprensione degli argomenti trattati durante il corso ed avrà la durata massima di due ore, durante le quali lo studente dovrà rispondere a domande a risposta multipla e/o aperta.
Gli studenti che non hanno superato la prova scritta, avranno la possibilità di analizzarne le criticità insieme al docente.
Per informazioni sui servizi di supporto agli studenti con disabilità e/o DSA visita la pagina http://www.unipg.it/disabilita-e-dsa. - Programma esteso
- Introduzione al corso; progettare, eseguire ed interpretare un esperimento di biochimica; uso di internet e delle banche dati
Lavorare in un laboratorio di Biochimica: la strumentazione di base; le operazioni più comuni (soluzioni stock e ìdiluizioni; il controllo del pH ecc)
Metodologie per la produzione di proteine ricombinanti: strategie di clonaggio di una sequenza codificante nota; sistemi di espressione; sistemi di produzione (batteri, lieviti, cellule di mammifero, cellule di insetto); proteine di fusione; uso dei tag; esempio di produzione di una proteina ricombinante
Tecniche di separazione: preparazione di un estratto, metodi di omogeneizzazione dei tessuti, di rottura delle cellule, di frazionamento subcellulare; frazionamento di miscele proteiche, centrifugazione, precipitazione frazionata con sali
Cromatografia: concetti generali, cromatografia ad esclusione molecolare, cromatografia a scambio ionico, cromatografia di affinità, cromatografia di ripartizione, cromatografia di adsorbimento, cromatografia liquida ad alte performance (HPLC)
Elettroforesi: principi generali, elettroforesi di proteine in condizioni native e denaturanti (SDS-PAGE), focalizzazione isoelettrica, elettroforesi bidimensionale, colorazione dei gel (comassie brilliant blue, silver staining, coloranti fluorescenti, bromuro di etidio), elettroforesi di acidi nucleici.
Dosaggi quantitativi: saggi colorimetri per la determinazione della concentrazione delle proteine; metodi radioisotopi; tecniche immunochimiche (western blotting, ELISA, RIA)
Metodi spettroscopici per lo studio delle proteine: spettroscopia di assorbimento UV-Visibile, la legge di Lambert-Beer; i gruppi cromofori; rette di tarature per analisi quantitative; metodi per il dosaggio delle proteine (Bradford, biureto, BCA, Lowry); cenni di spettroscopia di fluorescenza.
Spettrometria di massa e sue applicazioni.
Enzimi, misura di attività enzimatica, (Kat., UI), preparazione ed esecuzione di un dosaggio enzimatico; determinazione della concentrazione di un enzima, della concentrazione del substrato, della Km e del tipo di inibizione. I Biosensori quali esempi dell’uso della cinetica enzimatica per dosare enzimi o substrati.